产品货号:
BTN90402
中文名称:
蛋白胶微量回收试剂盒
英文名称:
Protein Gel Mini-Extraction Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是专门用来从聚丙烯酰胺凝胶中回收蛋白的试剂盒。
保存:室温,有效期一年。
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SDS-PAGE电泳不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量,而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一,随着蛋白质技术的微量化,有必要从PAGE凝胶中回收蛋白质以用于制备抗体、用于免疫印迹实验、用于氨基酸组分分析或末端序列测定等。
- 简单,不需要购买复杂而昂贵的仪器设备(如电洗脱仪)。
- 适用于变性胶(SDS-PAGE)和非变性胶(如Blue PAGE)。
- 蛋白的回收率一般在50~90%之间(跟蛋白质大小,洗脱时间相关)。
- 回收的蛋白可用于后续多种实验,包括2-D电泳、质谱测序等。
组分 | 规格 |
PAGE胶蛋白回收试剂溶液A | 10mL |
PAGE胶蛋白回收试剂溶液B | 50mL |
保存:室温,有效期一年。
- 按常规方法进行变性SDS-PAGE、尿素-PAGE,Tricine-SDS-PAGE电泳,或非变性蛋白电泳,如Bule PAGE。由于PAGE胶固定和染色后,蛋白回收效果很差,所以建议把蛋白样品同时上样到多个孔中并电泳。
- 电泳结束后,在对PAGE胶进行固定和染色时,切下其中一个样孔所对应的胶条进行固定和染色。
- 将出现蛋白条带后的胶条放回到在整个PAGE胶中此胶条切除前的位置,通过胶条上的蛋白条带来找到在未染色胶上该蛋白预计出现的区域,并切下此区域的PAGE胶(含未固定和为染色的目的蛋白)进行回收。
- 去除含目的蛋白的胶条的多余凝胶,否则它们会影响蛋白回收效率。
- 将修整后的PAGE胶条转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
- 用移液枪枪头充分将PAGE胶条戳击成尽可能细小的碎片。
- 加入200μL PAGE胶蛋白回收试剂溶液A,盖好盖子后平放在桌面摇床上,用胶带固定,4℃摇晃洗脱至少2~16小时(过夜)。
- 在样品摇晃时,将PAGE胶蛋白回收试剂溶液B放在-20℃冰箱预冷待用。
- 将含捣碎PAGE胶条的离心管在10000g离心10分钟,小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中。注意转移时千万不要吸走PAGE碎胶。
- 在含上清液的离心管中加入5倍体积的、预先冷却的PAGE胶蛋白回收试剂溶液B,充分摇晃混匀。
- 将离心管在-20℃放置30分钟。
- 室温12000g离心20分钟,小心弃上清。
- 打开盖在室温下让离心管充分晾干,关底沉淀即为回收的蛋白质。回收的蛋白质可溶解在适当的缓冲液中,可用于后续实验(2-D电泳、质谱测序等)。
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